PI染色检测细胞周期protocol

PI染色检测细胞周期protocol

1、离心收集细胞，弃上清，用预冷的PBS洗涤细胞两次。

2、加入预冷的70%乙醇，4°C固定过夜，或-20°C长时间固定（4°C过夜通常第二天测试PI染色检测细胞周期protocol，如果你愿意推迟几天测试PI染色检测细胞周期protocol，储存在-20℃，根据一些资料，-20℃可以储存一个月。个人建议尽量缩短测试时间。有些实验是收集细胞不同时间点，这个时候等最后固定完成测试，基本上太多了周期，一周内测试完成，暂时没有具体比较存放时间对效果的影响测试结果）。

3、细胞染色

离心收集细胞，用 1mL PBS 洗涤细胞一次，加入 500uL 含有 50ug/mL 溴化乙锭 (PI)、100ug/mL RNase A、0.2% Triton X-100 的 PBS，避免4°C 光孵育30分钟（PI我直接用PBS做工作浓度，然后加入细胞团混匀，现在加入RNase，但有时不加，发现没多少对实验结果的影响）。

4、流式分析

使用流式细胞仪按标准程序检测，一般计数20,000-30,000个细胞，用细胞周期拟合软件ModFit分析结果。

分析时，使用 FL2-w 和 FL2-A 显示，寄生虫细胞被去除。

流式细胞仪后细胞周期一般分为G0/G1、S、G2/M期。如果有细胞凋亡，则在G0/G1期之前有一个凋亡峰（也称为亚G0期）。并且如果在分析过程中细胞窗口设置不当，可能会在前面出现细胞碎片峰。

结果解读

G0/G1细胞占总数的61.2%周期，峰值位于45.76

在横坐标上

G2/M相占据13.07，峰值位于91.43

在横坐标上

S期占25.73

G2/G1为2.0（即G2期四倍体细胞和G1期二倍体细胞，比例为2）

峰的变异系​​数为4.54%（好）

细胞碎片 0.48%，细胞聚集体 0.06%。

细胞总数（仪器检测）为17525，

在细胞周期中分析的细胞数为17431（即排除碎片和聚集体后）

CV 是变异系数。通常，CV 越小，峰形越好、越尖锐。能控制在5%左右就不错了，一般10%以内都能识别出来。