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PI染色检测细胞周期protocol

PI染色检测细胞周期protocol

1、离心收集细胞,弃上清,用预冷的PBS洗涤细胞两次。

2、加入预冷的70%乙醇,4°C固定过夜,或-20°C长时间固定(4°C过夜通常第二天测试PI染色检测细胞周期protocol,如果你愿意推迟几天测试PI染色检测细胞周期protocol,储存在-20℃,根据一些资料,-20℃可以储存一个月。个人建议尽量缩短测试时间。有些实验是收集细胞不同时间点,这个时候等最后固定完成测试,基本上太多了周期,一周内测试完成,暂时没有具体比较存放时间对效果的影响测试结果)。

3、细胞染色

离心收集细胞,用 1mL PBS 洗涤细胞一次,加入 500uL 含有 50ug/mL 溴化乙锭 (PI)、100ug/mL RNase A、0.2% Triton X-100 的 PBS,避免4°C 光孵育30分钟(PI我直接用PBS做工作浓度,然后加入细胞团混匀,现在加入RNase,但有时不加,发现没多少对实验结果的影响)。

4、流式分析

使用流式细胞仪按标准程序检测,一般计数20,000-30,000个细胞,用细胞周期拟合软件ModFit分析结果。

分析时,使用 FL2-w 和 FL2-A 显示,寄生虫细胞被去除。

流式细胞仪后细胞周期一般分为G0/G1、S、G2/M期。如果有细胞凋亡,则在G0/G1期之前有一个凋亡峰(也称为亚G0期)。并且如果在分析过程中细胞窗口设置不当,可能会在前面出现细胞碎片峰。

结果解读

G0/G1细胞占总数的61.2%周期,峰值位于45.76

在横坐标上

G2/M相占据13.07,峰值位于91.43

在横坐标上

S期占25.73

G2/G1为2.0(即G2期四倍体细胞和G1期二倍体细胞,比例为2)

峰的变异系​​数为4.54%(好)

细胞碎片 0.48%,细胞聚集体 0.06%。

细胞总数(仪器检测)为17525,

在细胞周期中分析的细胞数为17431(即排除碎片和聚集体后)

CV 是变异系数。通常,CV 越小,峰形越好、越尖锐。能控制在5%左右就不错了,一般10%以内都能识别出来。

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